合成制备方法
1.取新鲜牛胰,绞碎,用0.125mol/L的冷硫酸溶液充分搅拌提取。提取液中加入硫酸铵使达到40%饱和度,冷室放置过夜,虹吸上层清液,底层加适量硅藻土助滤,上清液和滤液合并。然后,再加入硫酸铵,使达到70%饱和度,冷室放置过夜,上层清液弃去,底层沉淀过滤。然后用3倍量冰水溶解,重复用硫酸铵40%和70%饱和度分级沉淀。将第二次70%饱和度的沉淀滤饼,用1.5倍冰水溶解,并加0.5倍的饱和硫酸铵溶液,用氢氧化钠调pH=5,在25℃下进行结晶。结晶分离后,再加冰冷水溶解,调节pH=2,过滤。滤液中再加入2倍量饱和硫酸铵溶液,调pH=5,室温下结晶,过滤,可得糜蛋白酶原结晶。将糜蛋白酶原结晶,加3倍冰冷蒸馏水并滴加硫酸溶液,溶解后,加入pH=76磷酸缓冲液和一定量的氢氧化钠使pH值保持7.6,再在每100g糜蛋白酶原中加入胰蛋白酶5mg,5℃下活化48h。然后用硫酸调节pH=4,加入适量硫酸铵盐析,过滤,沉淀用0005mol/L硫酸溶解,室温下静置,有大量结晶生在,过滤,即可得糜蛋白酶。
用途
1.糜蛋白酶可作为蛋白分解酶,可用于手术后创口或创伤愈合、抗炎及防止局部积血、水肿、扭伤血肿等。
2.用于白内障摘除、松解睫状肌韧带,以减少囊膜破裂和视网膜损伤。