制备方法

方法一、酶转化法 酶液制备 取经多代发酵应用过的酵母渣;悬浮与适量的蒸馏水中,-20℃反复冻融3次即得酶液。 酵母渣(含FDP合成酶)[-20℃]→酶液 转化、除杂蛋白 上述酶液中加入底物(8%得蔗糖,4%NaH2PO4,0.29%MgCl2,pH6.5)于30℃反应6h,再煮沸5min,离心除去杂蛋白即得转化清液。 酶液[底物]→[30℃, 6h]转化液[煮沸]→ 转化清液 吸附、洗脱 转化清液通过DEAE-C阴离子交换柱层析,用蒸馏水洗涤至pH7.0,然后进行分离洗脱,收集洗脱液加入CaCl2生成其钙盐沉淀,过滤,得FDP钙盐。 转化清液[DEAE-C交换柱,水]→[pH7.0]洗脱液[CaCl2]→FDP钙盐 转化、成钠盐 FDP钙盐悬浮于水中,用732[H+]树脂将其转成 FDPH4,用2mol/L NaOH调pH至5.3-5.8成FDPNa3粗品。通过超滤、除菌、去热原、冻干即得FDPNa3精品。 FDP钙盐[732[H+]树脂]→FDPH4[2mol/L NaOH]→[pH5.3-5.8]FDPNa3粗品[过滤]→[除菌,支热原]超滤液→[冻干]FDPNa3精品 方法二、固定化细胞制备法 FDP产生菌的培养 啤酒酵母接种于麦芽汁斜面培养基上26℃培养24h,转入种子培养基中,培养至对数生长期,转种于发酵培养基中,于28℃发酵培养24h,静置一周,离心,收集菌体。 FDP产生菌种子[培养基]→[26℃, 24h]FDP产生菌体 固定化细胞的制备 取活化菌体用等体积生理盐水悬浮,预热至40℃,另用4倍量的生理盐水加热溶解卡拉胶(卡拉胶用量为3.2g/L),两者于45℃混合搅拌10min,倒入成型器皿中,4-10℃冷却30min,加入等量的22.2g/L KCl液浸泡硬化4h,切成3mm×3mm×3mm小块即成。 FDP产生菌体[卡拉胶,KCl]→ 固定化细胞 固定化细胞的活化 用含底物的表面活性剂,于35℃浸泡活化固定化细胞24h,以0.3mol/L KCl液洗涤后浸泡生理盐水中备用。 固定化细胞[0.3mol/L KCl, NaCl]→[35℃, 24h]活化固定化细胞 转化、除杂蛋白 用活化固定化细胞充填柱反应器,以上行法,通入30℃底物溶液(内含8%蔗糖,4%NaH2PO4,0.3%ATP,0.29%MgCl2)收集转化液,除去杂蛋白得转化清液。 活化固定化细胞[底物]→ 转化液[除杂蛋白]→转化清液 吸附、洗脱、成钙盐 将转化清液通过已处理好的DEAE-C阴离子交换柱,洗涤,再洗脱,收集洗脱液加入适量的CaCl2,生成FDP钙盐沉淀。 转化清液[DEAE-C柱]→洗脱液[CaCl2]→FDP钙盐 转酸、成钠盐 取FDP钙盐悬浮于无菌水中,用732[H+]树脂将其转成FDPH4,用2mol/L NaOH调pH至5.3-5.8成钠盐,活性炭脱色,超滤,冻干,得FDPNa3精品。 FDP钙盐[732[H+]树脂]→FDPH4[2mol/L NaOH]→[pH5.3-5.8]FDPNa3[超滤]→超滤液[冻干]→FDPNa3精品。

合成制备方法

方法一、酶转化法

酶液制备 取经多代发酵应用过的酵母渣；悬浮与适量的蒸馏水中，-20℃反复冻融3次即得酶液。

酵母渣(含FDP合成酶)[-20℃]→酶液

转化、除杂蛋白 上述酶液中加入底物(8%得蔗糖，4%NaH2PO4，0.29%MgCl2，pH6.5)于30℃反应6h，再煮沸5min，离心除去杂蛋白即得转化清液。

酶液[底物]→[30℃, 6h]转化液[煮沸]→[30min]转化清液

吸附、洗脱 转化清液通过DEAE-C阴离子交换柱层析，用蒸馏水洗涤至pH7.0，然后进行分离洗脱，收集洗脱液加入CaCl2生成其钙盐沉淀，过滤，得FDP钙盐。

转化清液[DEAE-C交换柱，水]→[pH7.0]洗脱液[CaCl2]→FDP钙盐

转化、成钠盐 FDP钙盐悬浮于水中，用732[H+]树脂将其转成 FDPH4，用2mol/L NaOH调pH至5.3-5.8成FDPNa3粗品。通过超滤、除菌、去热原、冻干即得FDPNa3精品。

FDP钙盐[732[H+]树脂]→FDPH4[2mol/L NaOH]→[pH5.3-5.8]FDPNa3粗品[过滤]→[除菌，支热原]超滤液→[冻干]FDPNa3精品

方法二、固定化细胞制备法

FDP产生菌的培养 啤酒酵母接种于麦芽汁斜面培养基上26℃培养24h，转入种子培养基中，培养至对数生长期，转种于发酵培养基中，于28℃发酵培养24h，静置一周，离心，收集菌体。

FDP产生菌种子[培养基]→[26℃, 24h]FDP产生菌体

固定化细胞的制备 取活化菌体用等体积生理盐水悬浮，预热至40℃，另用4倍量的生理盐水加热溶解卡拉胶(卡拉胶用量为3.2g/L)，两者于45℃混合搅拌10min，倒入成型器皿中，4-10℃冷却30min，加入等量的22.2g/L KCl液浸泡硬化4h，切成3mm×3mm×3mm小块即成。

FDP产生菌体[卡拉胶，KCl]→[4h]固定化细胞

固定化细胞的活化 用含底物的表面活性剂，于35℃浸泡活化固定化细胞24h，以0.3mol/L KCl液洗涤后浸泡生理盐水中备用。

固定化细胞[0.3mol/L KCl, NaCl]→[35℃, 24h]活化固定化细胞

转化、除杂蛋白 用活化固定化细胞充填柱反应器，以上行法，通入30℃底物溶液(内含8%蔗糖，4%NaH2PO4，0.3%ATP，0.29%MgCl2)收集转化液，除去杂蛋白得转化清液。

活化固定化细胞[底物]→[30℃]转化液[除杂蛋白]→转化清液

吸附、洗脱、成钙盐 将转化清液通过已处理好的DEAE-C阴离子交换柱，洗涤，再洗脱，收集洗脱液加入适量的CaCl2，生成FDP钙盐沉淀。

转化清液[DEAE-C柱]→洗脱液[CaCl2]→FDP钙盐

转酸、成钠盐 取FDP钙盐悬浮于无菌水中，用732[H+]树脂将其转成FDPH4，用2mol/L NaOH调pH至5.3-5.8成钠盐，活性炭脱色，超滤，冻干，得FDPNa3精品。

FDP钙盐[732[H+]树脂]→FDPH4[2mol/L NaOH]→[pH5.3-5.8]FDPNa3[超滤]→超滤液[冻干]→FDPNa3精品。

用途简介

适用于心肌缺血的辅助治疗。 注意事项:对本品过敏者、高磷酸盐血症及肾功能不全者禁用。

用途

适用于心肌缺血的辅助治疗。

注意事项：对本品过敏者、高磷酸盐血症及肾功能不全者禁用。