制备方法

以Micromonospora olivoasterospora MK-70(ATCC 21819或FERM-P No.1560)为菌种。过程如下: 一、种子制备 (1)在50ml大试管中,放人10m1种子液,其组成为0.1%葡萄糖、0.5%胨、0.5%酵母萃和0.1%碳酸钙(灭菌前pH值为7.5)。植入一圈菌种,在30℃下培养5d。 (2)在250ml锥形瓶中,放入30ml第二种子液(组成同前)。植入10ml第一种子培养液,在30℃下振荡培养2d。 (3)在2L装有分流板的锥形瓶中,放人300ml第三种子液(组成同前)。植入30ml第二种子培养液,在30℃下振荡培养2d。 (4)在30L玻璃缸发酵罐中,装人15L种子液(组成同前)。植入1.5L第三种子培养液(相当于5瓶的量),在充气(15L/min)和搅拌(350r/min)下,于37℃进行培养2d。 二、发酵 在300L发酵罐中,装人150L主发酵液。主发酵液的组成为4%可溶性淀粉、2%大豆粉、1%玉米浸液、0.05%K2HPO4、0.05%MgSO47H2O、0.03%KCl和0.1%CaCO3(灭菌前pH值为7.5)。植入15L第四种子培养液,在充气(80L/min)和搅拌(150r/min)下,于37℃培养4d。 三、提取和精制 (1)发酵结束后,发酵液用浓硫酸调pH值至2.5,搅拌30min。加入约7kg助滤剂(Radiolite No.600,日本Showa Kagaku Kcgyo Co,Ltd),过滤除去微生物孢。滤液用6mol/L氢氧化钠调pH值至7.5。 (2)通入装有20L阳离子交换树脂(Amberlite IRC-50,铵型)的柱子。丢弃流出液,活性物质吸附在树脂上。用水洗柱子后,再用1mol/L氨水洗脱。收集含活性物质的洗脱液,减压浓缩至约1L。 (3)上述浓缩液通过装有500ml阴离子交换树脂(Dowex 1×2,OH型)的柱子,用约2L水洗脱,以移去杂质,并将活性物质洗脱。收集含活性物质的洗脱液,减压浓缩至约100ml。 (4)将上述浓缩液通过装有50ml活性炭粉末的柱子。活性物质吸附在活性炭上。先用水洗,并丢弃。用0.1mol/L硫酸将活性物质洗脱。收集含活性物质的洗脱液。 (5)将上述得到的洗脱液通过装有Dwex 44(OH型)柱子,然后用水将活性物质洗脱。收集含活性物质的洗脱液,浓缩至约50ml。 (6)将浓缩液冻干,得到32g含福提霉素A的粗品粉末。该粗品的活性为575单位/mg(每1mg纯品相当于1000单位)。 (7)10g该粗品用500ml硅胶玻璃柱进行层析,洗脱液为氯仿、异丙醇和17%氨水(体积比为2:1:1)的混合液,流出速度为50ml/h。先洗脱出的是福提霉素B,然后是福提霉素A。收集含福提霉素A的流出液,减压浓缩至完全移去溶剂。 (8)浓缩液溶入小量水,冻干后得1.8g纯福提霉素A,其活性为970单位/mg。

合成制备方法

以Micromonospora olivoasterospora MK-70(ATCC 21819或FERM-P No．1560)为菌种。过程如下：
一、种子制备
(1)在50ml大试管中，放人10m1种子液，其组成为0.1%葡萄糖、0.5%胨、0.5%酵母萃和0.1%碳酸钙(灭菌前pH值为7.5)。植入一圈菌种，在30℃下培养5d。
(2)在250ml锥形瓶中，放入30ml第二种子液(组成同前)。植入10ml第一种子培养液，在30℃下振荡培养2d。
(3)在2L装有分流板的锥形瓶中，放人300ml第三种子液(组成同前)。植入30ml第二种子培养液，在30℃下振荡培养2d。
(4)在30L玻璃缸发酵罐中，装人15L种子液(组成同前)。植入1.5L第三种子培养液(相当于5瓶的量)，在充气(15L/min)和搅拌(350r/min)下,于37℃进行培养2d。
二、发酵
在300L发酵罐中，装人150L主发酵液。主发酵液的组成为4%可溶性淀粉、2%大豆粉、1%玉米浸液、0.05%K2HPO4、0.05%MgSO4?7H2O、0.03％KCl和0.1%CaCO3(灭菌前pH值为7.5)。植入15L第四种子培养液，在充气(80L/min)和搅拌(150r/min)下，于37℃培养4d。
三、提取和精制
(1)发酵结束后，发酵液用浓硫酸调pH值至2.5，搅拌30min。加入约7kg助滤剂(Radiolite No．600，日本Showa Kagaku Kcgyo Co，Ltd)，过滤除去微生物孢。滤液用6mol/L氢氧化钠调pH值至7.5。
(2)通入装有20L阳离子交换树脂(Amberlite IRC-50，铵型)的柱子。丢弃流出液，活性物质吸附在树脂上。用水洗柱子后，再用1mol/L氨水洗脱。收集含活性物质的洗脱液，减压浓缩至约1L。
(3)上述浓缩液通过装有500ml阴离子交换树脂(Dowex 1×2，OH型)的柱子，用约2L水洗脱，以移去杂质，并将活性物质洗脱。收集含活性物质的洗脱液，减压浓缩至约100ml。
(4)将上述浓缩液通过装有50ml活性炭粉末的柱子。活性物质吸附在活性炭上。先用水洗，并丢弃。用0.1mol/L硫酸将活性物质洗脱。收集含活性物质的洗脱液。
(5)将上述得到的洗脱液通过装有Dwex 44(OH型)柱子，然后用水将活性物质洗脱。收集含活性物质的洗脱液，浓缩至约50ml。
(6)将浓缩液冻干，得到32g含福提霉素A的粗品粉末。该粗品的活性为575单位/mg(每1mg纯品相当于1000单位)。
(7)10g该粗品用500ml硅胶玻璃柱进行层析，洗脱液为氯仿、异丙醇和17%氨水(体积比为2：1：1)的混合液，流出速度为50ml/h。先洗脱出的是福提霉素B，然后是福提霉素A。收集含福提霉素A的流出液，减压浓缩至完全移去溶剂。
(8)浓缩液溶入小量水，冻干后得1.8g纯福提霉素A，其活性为970单位/mg。