面粉和麦芽粉的蛋白质水解活性

谷物

消化法

              〔适用于如特级面粉的低活性物质或者是活性蛋白质水解制品的稀提取物。〕
A 试剂
    
A.a 缓冲储备液
    pH4.7。用H2O将120mlHOAc和164g无水NaOAc稀释到1L。使用前用H2O稀释20倍。
A.b Bacto
    血红蛋白底物
A.c 三氯乙酸〔TCA〕溶液
    将180g三氯乙酸溶于320mlH2O。
B 测定
    
B.a 酶溶液的制备
    对于像面粉一样的微活性物质，直接将10g样品称入消化瓶。对于活性酶制品，在消化前立即制备稀缓冲溶液，A(a)中的提取液或悬浮液〔在消化混合物中所用提取液或稀释液的量可变动到2ml，对于酶提取物可应用合适的活化技术〕。
B.b 消化操作
    各称2.50g〔无H2O基体〕Bacto-血红蛋白分别放入2个125ml锥形瓶中，在各瓶中加约5g或1匙细沸石和面粉样品(a)。转动搅拌混合直到面粉与底物完全混合。然后向每个瓶中加50ml预先在温控水浴中加热到40±0.1℃的稀醋酸缓冲溶液并搅拌混合到悬浮均匀。把塞紧的烧瓶放入40℃水浴中连续搅动或者每隔1h搅动一次。$$消化15min后向一个瓶中加10ml一份的TCA(c)，而在消化5.25h后向第二个瓶中加10ml一份的TCA(c)。各瓶剧烈水平运动摇动25次，而且使瓶子在40℃水浴中准确保持30min。以1800r/min离心悬浮液5min，过滤〔像面粉一类的物质可能在最后过滤后仍然混浊；在最后过滤前应将已离心的消化混合物煮沸几秒钟使其变清。加H2O补充因蒸发而损失的