兔子白三烯B4(TB4ELSA试剂盒
注意事项
应分别以
验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说
明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭
2.在ELSA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括
(1)固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氨乙烯、聚苹乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒
当前常用的是40孔聚苹乙烯叫孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察
其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
2)包被抗体〔或抗原)的选擇∶将抗体〔或抗原〕吸附在相载体表面时,要孓纯度要好,吸附时一殷要求PH在9.0~9.6之间。吸跗温
度,时间及其蛋白量也有一走影响,一般多采用418~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴走:即用不同的蛋白质浓度(01、1.0
和10g/m等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说道
常为1~10ug/ml
(3)酶标记抗体工作浓庋的选擇∶首先用直接EL巧SA法进行初步效价的滴定〔见酶标记抗体部份)。然后再圉定其它条件或采取“方阵
法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地淯定其工作浓度ε
(4)酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的洗择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在
的致瘟作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是当前较为满意的供氢体。底物作用一段时间
后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H202在临用前加入