人转化生长因子β1(TGF-β1)elisa试剂盒

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人转化生长因子β1（TGF-β1）水平。用纯化的人转化生长因子β1（TGF-β1）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入转化生长因子β1，再与HRP标记的羊抗人抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人转化生长因子β1（TGF-β1）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人转化生长因子β1（TGF-β1）浓度。

标本要求
1．标本采集后尽早进行实验。
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
3．可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
操作步骤
1.         标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为（600 ng/L，400ng/L ，200ng/L，100 ng/L，50 ng/L）。
2.         加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.         温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  
4.         配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
5.         洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.         加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.         温育：操作同3。
8.         洗涤：操作同5。
9.         显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10.     终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.     测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
计算
  以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

本试剂盒仅供研究使用。
了解更多产品如下：
# elisa试剂盒 www.gychemicals.com
# 细胞
# 酶联免疫elisa试剂盒
# NF-KB检测试剂盒
# elisa检测试剂盒
# 干细胞
# 细胞系
# 原代细胞
# PCR试剂盒
# 酶联免疫elisa试剂盒
# ATCC细胞
# elisa试剂盒
# ATCC细胞
# elisa试剂盒
# ELISA检测试剂盒
# ATCC细胞
# 检测试剂盒
# 原代细胞
# 试剂盒
# ELISA检测试剂盒
# ＡＴＣＣ细胞
# elisa酶联免疫检测试剂盒       
# ATCC细胞
# elisa定量检测试剂盒
# 酶联免疫分析试剂盒
# ELISA检测试剂盒
# PCR试剂盒
# DRG试剂盒
# 原代细胞
# elisa酶联免疫试剂盒
# PCR进口试剂盒
# 细胞生物学试剂