游离脂肪酸含量测定测定原理：

可催化血红蛋白水解，水解产物与福林试剂反应后显蓝色；一定范围内，其颜色的深浅与胃蛋白酶活性呈正比。自备仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。试剂组成和配制：试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。试剂三：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加入10mL试剂二充分溶解。试剂四：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入10mL蒸馏水充分溶解。试剂五：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入15mL蒸馏水充分溶解。试剂六：液体×1 瓶，4℃保存。标准品：液体×1 支，0.5μmol/mL 酪氨酸标准溶液浓度4℃保存。粗酶液提取：组织样品：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清，即粗酶液。测定步骤：1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到580nm，蒸馏水调零。2. 试剂三和试剂四置于37℃水浴预热30min。3. 标准管：取0.5 mL EP管，加入20μL标准品，40μL试剂二，120μL试剂五，20μL试剂六， 混匀后室温静置20min，取200μL于微量玻璃比色皿/96 孔板，580 nm 测光吸收，记为A 标准管。4. 空白管：取0.5 mL EP管，加入20μL蒸馏水，40μL试剂二，120μL试剂五，20μL试剂六， 混匀后室温静置20min，取200μL于微量玻璃比色皿/96 孔板，580nm测光吸收，记为A标准空白管。5. 对照管：取0.5mL EP管，加入100μL试剂三，置于37℃水浴保温10min；加入100μL试剂四， 盖紧后摇匀1min；加入20μL粗酶液，混匀后 8000g 4℃离心10分钟；取上清液20μL，加入新 EP管，再加入40μL试剂二，120μL试剂五，20μL试剂六，混匀后室温静置20min，取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，580nm测光吸收，记为A空白管。6. 测定管：取0.5mL EP管，加入20μL粗酶液，100μL试剂三，置于37℃水浴保温10min；加入100μL试剂四，盖紧后摇匀1min；8000g 4℃离心10分钟；取上清液20μL，加入新EP管，再加入40μL试剂二，120μL试剂五，20μL试剂六，混匀后室温静置20min，取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，580nm测光吸收，记为A测定管。 注意：空白管和标准管只需要测定一次。