产品名称

1,4-哌嗪二乙磺酸

CAS NO

5625-37-6

中文别名

哌嗪-1,4-双(2-乙基磺酸);哌嗪-N,N'-双(2-乙磺酸);哌嗪-1,4-双(2-乙烷磺酸);哌嗪-1,4-二乙磺酸;哌嗪-N,N'-二(2-乙磺酸)

英文名称

1,4-Piperazinediethanesulfonicacid

英文别名

1,4-Piperazinebis(ethanesulfonicacid); 1,4-Piperazinebis(ethansulfonic acid); NSC 157117; PIPES;Piperazine-1,4-bis(2-ethanesulfonic acid); Piperazine-N,N'-bis(2-ethanesulfonicacid)

分子式

C₈H₁₈N₂O₆S₂

分子量

302.36

EINECS

227-057-6

熔点

>300°C(lit.)

沸点

毒性

哌嗪二乙磺酸PIPES有多种缓冲液体系，其中缓冲溶液Transformation Buffer（也叫TB溶液）可用于制备高效率感受态的细胞。

感受态是指细胞（或细菌）能够从周围环境中摄取，并且不易被细胞内的分解时所处的一种特殊生理状态。有些细菌是自然感受态，如，有些是人工感受态，如大肠杆菌。经过特殊方法处理受体细胞，可改变细胞膜通透性，使其成为容许有外源DNA的载体分子通过的。

感受态TB溶液原料——PIPES粉末

Transformation Buffer制备：

配制哌嗪二乙磺酸PIPES 3.0g 10mM、CaCl2·2H2O 2.2g 15mM、KCl 18.6g 250mM，加水 950ml，用5N KOH 调PH至6.7-6.8*低PH不溶，再加终浓度为55mM的MnCl2·4H2O 10.9g定溶到1升，过滤灭菌，4度保存。

感受态细菌细胞的转化采用氯化钙的方法。液氮或低温冰箱中取出的大肠杆菌，在LB平板上划线，37度过夜至长出单菌落。挑直径1-3mm 的菌落接种到250ml/3L锥形瓶或80ml/1L 锥形瓶的SOB培养基。在18度150-250RPM 培养19-50h。当OD600约0.4-0.8时停止培养，放在4度冰水中冷却10min，300RPM离心15min，回收菌体去掉上清后，用1/3体积的冰冷TB溶液悬浮，在冷10min再次离心回收菌体用1/12.5体积的TB悬浮，添加最终浓度为7%的DMSO，再冷却10分钟0.1-1ml 分装，直接在液氮或-80度保存。

悬浮大肠杆菌的TB溶液中，主要其作用成分包括缓冲液PIPES和使细胞转化成感受态的氯化钙。需要注意的是，该方法适用不含有质粒的，而不适合大质粒，冻存后转化效率有降低的可能。另外，不同细菌菌株的最适宜OD600也是是不同的，需要根据不同试验调整。

用TB制备感受态细胞的方法还有很多，不同的方法效率高低可能有差异，适用的菌种或细胞类型也可能不同。德晟生产的PIPES为粉末试剂，可根据不同的需求自行配制感受态TB溶液。