合成制备方法
溶菌酶在等电点以下较广泛的pH值范围内,分子带正电荷,可吸附于弱酸性阳离子交换树脂上,洗脱后盐析,可得溶菌酶沉淀,再进行精制可得成品。
蛋清吸附↓724树脂洗涤↓缓冲液洗脱↓硫酸铵溶液盐析透析
去碱性蛋白↓NaOH冻干溶菌酶冻干粉沉淀干燥溶菌酶
在5~10℃下,将新鲜蛋清540kg加入到已处理好的80kg 724树脂中,搅拌吸附6h,在0~5℃静置过夜。倾出上层蛋清,树脂离心甩干,用蒸馏水反复洗去黏附的卵蛋白,然后将树脂装入柱内,用015mol/L、pH=65磷酸缓冲溶液约150L洗涤树脂,再用约600L的10%硫酸铵溶液洗脱,收集洗脱液。洗脱液中加硫酸铵,使最终含硫酸铵量为40%,有白色沉淀生成,冷处放置过夜。虹吸上层清液,沉淀吸滤抽干,再用1倍蒸馏水溶解沉淀呈稀糊状,然后装入透析袋,在约5℃的条件下,对蒸馏水透析24h左右,中间换水2~3次。离心去除沉淀,沉淀再用少量水洗一次,洗液与离心液合并。再往透析清液中慢慢加入1mol/L氢氧化钠溶液,同时不断搅拌,使pH值上升到80~90,如有白色沉淀,即离心除去。然后用3mol/L盐酸调pH=50,冷冻干燥,即得白色片状溶菌酶。也可将离心液用3mol/L盐酸调pH=35,在搅拌下缓慢加入5%的固体氯化钠,在约5℃的温度下静置48h,离心,沉淀用0℃丙酮洗涤,干燥,即得溶菌酶。
用途
1.可参与黏多糖代谢,能催化革兰氏阳性菌细胞壁不溶性多糖水解为可溶性黏肽,是一种有杀菌作用的天然物质。具有抗菌、抗病毒、止血、清肿、镇痛及加快组织修复等功能。常用于急性咽喉炎、口腔溃疡、扁平苔藓以及慢性鼻炎、咽喉炎和扁平疣的治疗。