武汉戴安生物技术有限公司成立于2015年，位于武汉光谷生物城生物技术研究院，是一家由资深免疫学专家和海外留学人员创建的高科技生物技术企业。公司专注于诊断试剂及其核心原料的研发生产及技术服务工作。公司拥有完善的蛋白质表达体系，抗体制备体系，诊断试剂研发体系，研发人员拥有十余年从业经验，技术积累深厚，设备精良完善，在重组蛋白质表达纯化、天然蛋白质提取、抗体研发和生产方面达到行业较高水平，已建立了从诊断试剂抗原抗体原料开发，到诊断试剂制备的研发生产路线，拥有诊断用抗原抗体的研发及放大生产技术平台，生化试剂大包装研发生产平台，核心产品包括SAA，AFP，PCT，铁蛋白等项目的抗体、校准品和生化试剂。公司也为客户提供专业的抗体定制及相关技术服务，包括科研用多抗和单抗定制，药物阻断用抗体筛选，中和抗体制备等技术服务。


1.背景信息
Flag-Tag（DYKDDDDK）， 常用于真核蛋白质重组表达标记。 FLAG标签（DYKDDDDK）蛋白免疫沉淀
(Immunoprecipitation)试剂盒， 主要成分是Anti-Flag亲和纯化凝胶（Anti-DYKDDDDK (Flag)
Affinity Gel），由高品质的Flag兔多抗与Sepharose 4B琼脂糖颗粒共价偶联制成，具有高载量
（至少为1.2mg protein/ml凝胶），高特异性，性质稳定，可反复使用的特点，可用于Flag标签融合
蛋白的纯化及免疫（共）沉淀(Immunoprecipitation, Co-Immunoprecipitation)。

2. 性能指标

应用范围： 可用于Met修饰的N端Flag融合蛋白（Met-Flag–Protein），N端Flag融合蛋白
（Flag–Protein）,C端Flag融合蛋白（Protein-Flag）及中部Flag融合蛋白的纯化及免疫（共）沉淀。

载量： 1ml Sepharose 4B琼脂糖颗粒，共价偶联800μg Anti-Flag 兔多抗，可至少做40次Flag标
签融合蛋白的免疫（共）沉淀。

强度：重力柱纯化，可反复使用5次以上。

成分：共价偶联Anti-Flag抗体的Sepharose 4B琼脂糖颗粒, 1ml溶于2ml PBS+50%甘油中。

保存方法： 在加入了50%甘油和0.2‰叠氮钠的PBS保存液后，预装纯化柱可于-20℃可保存1年。 3.使用方法
细胞裂解液制备 1) 悬浮细胞和半贴壁细胞从细胞培养瓶上吹下来后放入离心管中， 1000rpm 离心5分钟。贴壁细胞用细胞刮子
轻轻从瓶壁上刮下来，放入离心管中1000rpm离心5分钟。
2) 预冷的PBS重悬细胞，1000rpm离心3min，弃上清。重复一次。
3) 根据细胞的量加入相应体积的细胞裂解液， 反复吹打后冰上放置10-20min，让细胞充分裂解。
4) 用超声破碎仪将细胞裂解液超声，直至细胞裂解液透明，不再粘稠。冰上放置30min之后，12000rpm，4℃
离心10min。取上清，冷冻保存。

应用一. 免疫（共）沉淀法检测FLAG标签蛋白质

1) 重悬Anti-FLAG标签亲和凝胶至均一，转移30ul混合液(约含15ul凝胶)至离心管中，加入5倍凝胶体积PBS，
5000rpm x 30sec，弃上清，重复该步骤清洗凝胶三次。
2) 加入适量含有目标蛋白的真核细胞裂解液，室温孵育2hr或者4℃孵育过夜。
3) 加入5倍凝胶体积PBS，用上述离心法清洗凝胶三次； 预冷的5倍凝胶体积pH 5.0酸性预洗液洗涤凝胶, 除去
非特异性结合蛋白。离心，弃上清。
4) 加入5x上样缓冲液，煮沸5min，冷却至室温并离心。
5) 取上清进行SDS-PAGE或Western Blotting检测。

应用二. 亲和纯化FLAG标签蛋白质

1) 根据使用目的选用重力柱或离心管，移入适量亲和凝胶，10倍凝胶体积PBS清洗亲和凝胶。
2) 加入适量含有目标蛋白的真核细胞裂解液，室温孵育2hr或者4℃孵育过夜。
3) 5倍凝胶体积PBS洗凝胶三次； 用预冷的5倍凝胶体积pH 5.0酸性预洗液洗涤纯化凝胶, 除去非特异性结合蛋白。
根据需要从以下两种洗脱液中选择
a. 预冷的10倍柱体积pH 3.0的酸性洗脱液进行洗脱， 每次收集1ml, 收集管中预先放入中和液50μl。注意：酸性环境
会缩短亲和纯化凝胶的使用寿命，应尽量缩短亲和纯化凝胶与酸性洗脱液的接触时间。
b. 加入10倍凝胶体积 3×Flag peptide洗脱液进行洗脱， 每次收集1ml。
4) 用紫外检测仪测定收集峰, 合并收集峰。
SDS-PAGE鉴定蛋白质纯度及浓度，并按照需求处理和保存蛋白质。

4.推荐缓冲液配方
以下配方仅为本公司推荐，客户应根据具体情况进行调整 细胞裂解液： 150mM NaCl, 50 mM Tris-HCL(PH8.0)，1% Triton X-100，5 mM EDTA
3×Flag peptide洗脱液： 3xFlag peptide干粉，使用前溶于10 ml 1xPBS，工作浓度为100μg/ml
酸性洗脱液： 0.15M Gly-HCl缓冲液，pH3.0
中和液： 1M Tris HCl缓冲液，pH8.0
10xPBS： 1.5M PBS buffer， pH7.5，with 2‰ Azide （使用时须用双蒸水稀释10倍）
酸性预洗液： 0.15M PBS buffer，pH5.0

公司介绍：

武汉戴安生物技术有限公司座落于武汉光谷生物城生物技术研究院，是一家由资深免疫学专家和海外留学人员创建的高科技生物技术企业。公司专注于体外诊断（IVD）试剂及其核心原料的研发生产及技术服务工作, 已成功建立了从IVD核心原料到试剂生产的研发生产路线，完成了原料开发à诊断试剂研发à诊断试剂放大生产的整个技术流程构建，拥有独立自主的抗原抗体的研发、放大生产技术平台及生化试剂大包装研发生产平台。

公司主要核心产品

IVD核心原料 AFP，孕酮，人血红蛋白，人白蛋白，人铁蛋白，人心型脂肪酸结合蛋白，人癌胚抗原CEA，人前列腺特异性抗原PSA等配对单抗；用于生化比浊检测平台的包括人血清蛋白A（SAA）多抗，人心型脂肪酸结合蛋白HFABP多抗，人肌红蛋白MYO多抗，人beta-2微球蛋白B2M多抗，人降钙素原PCT多抗等原料。

IVD大包装试剂 (mALB）胶乳增强免疫比浊试剂，心型脂肪酸结合蛋白（HFABP）胶乳增强免疫比浊试剂，甲胎蛋白（AFP）胶乳增强免疫比浊试剂，铁蛋白胶乳增强免疫比浊试剂，人血清蛋白A（SAA）胶乳增强免疫比浊试剂等。

真核蛋白检测及纯化系列产品 Flag，HA，Myc，GFP等真核表达蛋白质标签的抗体系列产品，并进一步开发了用于免疫沉淀检测，及亲和纯化的凝胶系列产品，可广泛使用于真核蛋白质的检测及纯化。

公司主要技术服务类型

（1） 多抗制备服务，可提供小鼠、大鼠和兔等多种动物来源的多*抗体制备服务；

（2）保证型单抗制备服务 ，保证内源性IHC、WB、 IF、FC等检测结果；

（3）中和单抗制备服务，拿到有中和作用的阳性细胞株、抗体；

（4）修饰性抗体制备服务，可提供磷酸化，乙酰化，琥珀酰化等修饰性抗体制备，保证与非修饰性多肽的交叉反应<10% ；

（5）重组蛋白表达与纯化服务，大肠杆菌系统，提供蛋白质表达，及活性蛋白鉴定等；

（6）ELISA试剂盒开发服务，从基因、蛋白到下游抗体配对，试剂盒开发，天然样本检测完整的试剂盒开发服务。