- 产品名称
- 7-氨基放线菌素D
- CAS NO
- 7240-37-1
- 中文别名
- 7-氨基放线菌素D
- 英文名称
- 7-AMINOACTINOMYCIN D
- 英文别名
- 7-AAD;7-AMINODACTINOMYCIN;7-AMINOACTINOMYCIN;7-AMINOACTINOMYCIN C1;7-AMINOACTINOMYCIN D;7-AMINO-AMD;7-ADD;7-ACTINOMYCIN C
- 分子式
- C62H87N13O16
- 分子量
- 1270.43
- EINECS
- 熔点
- 252～253℃
- 沸点
- 1400.8 °C at 760 mmHg
- 毒性
一、基础标识信息
- 中文正式名称：7-氨基放线菌素 D
- 英文全称：7-Aminoactinomycin D
- 通用缩写：7-AAD
- CAS登记号：7240-37-1
- 化学分类：放线菌素类多肽荧光染料、DNA嵌入剂
- 分子式：$\mathrm{C_{61}H_{88}N_{18}O_{16}}$
- 相对分子质量：1362.45
二、理化性质
- 外观形态：固体粉末，呈深红色/紫红色；商品化试剂多为水溶液储存液
- 溶解性：溶于甲醇、DMSO、水；水溶液避光条件下稳定
- pH适配：中性缓冲液（pH 7.2~7.4）染色效果最优，强酸强碱会降低荧光强度
- 稳定性：干粉-20℃避光长期保存；稀释工作液4℃避光可存放1周，不可反复冻融
- 荧光光学特性 （1）最大激发波长：546 nm（绿光激发） （2）最大发射波长：647 nm（远红光） （3）荧光通道适配：流式细胞仪PerCP、PE-Cy5、APC通道，与FITC、PE光谱重叠极小，适合多色组合
三、染色作用机理
- 细胞膜选择性通透特性
- 完整活细胞膜脂质双层屏障完整，7-AAD分子量大、带电荷，无法穿透，活细胞无荧光信号；
- 晚期凋亡、坏死细胞细胞膜破损，染料自由进入胞内。
- DNA结合机制
- 特异性嵌入双链DNA中GC碱基富集区域；
- 与DNA结合后荧光强度显著提升，游离染料荧光微弱，背景极低。
- 染色不可逆：染料结合DNA后无法洗脱，细胞后续无复苏活性，仅用于终点检测。
四、核心实验应用场景
（1）流式细胞术细胞凋亡检测（最主流用途）
- Annexin V-FITC + 7-AAD 双染分群判定标准
- Annexin V? / 7-AAD?：正常活细胞
- Annexin V? / 7-AAD?：早期凋亡细胞（膜外翻，膜完整性未破坏）
- Annexin V? / 7-AAD?：晚期凋亡细胞
- Annexin V? / 7-AAD?：机械损伤、坏死细胞
- 免疫分型去背景 免疫表型检测时加入7-AAD，圈门剔除死细胞，消除死细胞非特异性荧光结合，提高阳性/阴性细胞区分度。
- 微生物死活鉴定：区分细菌、真菌活/死菌体。
（2）免疫荧光组织/细胞切片染色
- 固定石蜡切片、冰冻切片中标记坏死细胞核；
- 搭配DAPI、绿色荧光二抗做多标染色，定位坏死区域。
（3）细胞周期辅助检测（次要用途）
可替代PI进行DNA含量检测，但染色成本更高，常规周期实验优先碘化丙啶PI。
五、7-AAD 对比 PI（碘化丙啶）优势与劣势
优势
- 发射光波长更长，远红光区间，和FITC、PE荧光串扰少，支持4色及以上多色流式方案；
- 游离染料本底荧光低，阴性细胞基线干净，分群边界清晰；
- 短时间孵育对细胞损伤更小，染色操作窗口期宽。
劣势
- 单价高于PI，实验成本更高；
- 分子量更大，通透速度略慢，孵育时间需适当延长；
- 对GC富集DNA结合偏好更强，DNA定量精准度略低于PI。
六、标准实验操作要点（凋亡染色）
- 细胞制备：胰酶消化收集悬浮细胞，预冷PBS洗涤2次，去除血清、碎片杂质；
- 缓冲液配制：使用含Ca²?、Mg²?的Annexin V结合缓冲液，离子是膜磷脂结合必需条件；
- 染色体系：100 μL细胞悬液中加入Annexin V荧光抗体与7-AAD工作液；
- 孵育条件：室温避光5~15 min，避光避免荧光淬灭；
- 上机检测：孵育完成1小时内完成流式采集，染色后放置过久信号衰减。
七、安全操作与毒性说明
- 细胞毒性：放线菌素骨架结构可抑制细胞转录，对活细胞有强毒性，仅用于终点检测；
- 致癌风险：DNA嵌入剂，存在潜在遗传毒性、致癌风险；
- 操作防护
- 全程佩戴一次性手套、口罩，粉末操作在通风橱进行；
- 避免皮肤黏膜接触、吸入粉尘、试剂入口；
- 废液废弃物处理
- 含7-AAD废液单独收集，不可直接倒入下水道；
- 离心管、吸头等耗材按有毒生化废物统一高温灭活后处理。
八、试剂储存与失效判断
- 干粉储存：-20℃、完全避光、干燥密封，有效期2年以上；
- 储备液（水溶液/DMSO）：分装避光-20℃保存，避免反复冻融；
- 失效判断标准
- 液体出现沉淀、褪色；
- 阳性对照坏死细胞荧光信号显著下降；
- 阴性细胞出现大面积非特异性荧光背景。
九、实验局限性
- 无法区分早期凋亡细胞，必须联合Annexin V共同检测；
- 仅终点染色，不能用于活细胞动态实时观测；
- 固定通透后的活细胞样本会全部被染色，无法区分死活；
- 高浓度EDTA会破坏细胞膜钙离子环境，抑制Annexin V结合，干扰凋亡分群结果。
