- 产品名称
- 潮霉素B
- CAS NO
- 31282-04-9
- 中文别名
- 湿霉素乙；效高素；潮霉素B85+%；潮霉素B98+%；潮霉素B溶液
- 英文名称
- D-Streptamine,O-6-amino-6-deoxy-L-glycero-D-galacto-heptopyranosylidene-(1®2-3)-O-b-D-talopyranosyl-(1®5)-2-deoxy-N3-methyl-
- 英文别名
- HygromycinB (7CI); Antihelmycin; Hygromix 2.4; Hygromix-8; Hygrovetin; Hygrovetine
- 分子式
-
C20H37N3O13
- 分子量
- 545.54
- EINECS
- 250-545-5
- 熔点
- 160-180oC
- 沸点
- 897.6oC at 760 mmHg
- 毒性
- 1、 急性毒性：大鼠吸入LC50：2220μg/m3/4H 大鼠腹腔LD50：63mg/kg 小鼠经口LD50：46000units/kg 小鼠腹腔LDLo：6mg/kg 小鼠静脉注射LD50：6mg/kg 豚鼠腹腔LD50：13mg/kg2、 其他多剂量毒性：大鼠经口TDLo：
潮霉素B Hygromycin B（CAS：31282-04-9）
一、基础标识信息
1. 标准命名
- 中文通用名：潮霉素B
- 中文别名：湿霉素乙、潮霉素乙
- 英文名称：Hygromycin B
- 英文别名：Hydrovetine、Hygromycin B from Streptomyces hygroscopicus
- CAS号：31282-04-9
- 化学系统名：O-6-氨基-6-脱氧-L-甘油-D-半乳庚吡喃糖亚基-(1-2-3)-O-β-D-塔罗吡喃糖基-(1-5)-2-脱氧-N³-甲基-D-链霉胺
2. 分子化学参数
- 分子式：$\mathbf{C_{20}H_{37}N_3O_{13}}$
- 精确分子量：527.52
- 密度：1.7±0.1 g/cm³
- 沸点：897.6±65.0 ℃（760mmHg）
- 酸碱性：0.1g/20mL水溶液pH 6.0–8.0，近中性
- 纯度规格：科研级≥90%（HPLC）；饲料级85%–125%效价；生物筛选专用效价≥1050 U/mg
3. 来源与生产
天然由吸水链霉菌 Streptomyces hygroscopicus 发酵分泌，工业采用离子交换层析纯化获得纯品粉末。
二、理化性质
- 外观：类白色、浅黄至黄褐色冻干粉末；水溶液呈浅棕黄色澄清液体
- 溶解性
- 极易溶：水（溶解度＞50 mg/mL）、甲醇、乙醇
- 不溶：乙醚、氯仿、苯、丙酮等弱极性有机溶剂
- 热稳定性
- 固体粉末：常温短置稳定，高温（＞60℃）缓慢失活
- 水溶液：严禁高压灭菌（121℃），加热至60℃以上活性大幅降解；培养基需降温至55℃以下再加药
- 杂质控制标准（试剂级）
- 干燥失重≤13.0%
- 灼烧残渣≤20.0%
- 重金属（Pb）≤0.002%
- 砷（As）≤0.0004%
三、完整作用机理（原核+真核通用）
潮霉素B为广谱氨基糖苷类抗生素，同时抑制70S原核核糖体与80S真核核糖体，是少数跨原核/真核通用筛选药，作用分两层：
- 核心翻译阻断 稳定核糖体A位肽酰-tRNA复合物，阻断EF2介导的核糖体易位（移位步骤），空载tRNA无法脱落，多肽链延伸完全终止，细胞蛋白合成停滞致死。
- 次级毒性：mRNA错读 诱导密码子-反密码子配对错误，合成大量无功能异常蛋白，加速细胞凋亡/裂解。
- 附加靶点（高浓度） 抑制30S核糖体小亚基组装，阻断核糖体生物发生；翻译抑制IC??≈16 μg/mL，核糖体组装IC??≈65 μg/mL。
四、抗性机制（筛选核心原理）
实验室配套抗性基因为 hph / hyg（潮霉素磷酸转移酶基因）
- 基因来源：吸水链霉菌天然抗性基因、工程改造大肠杆菌质粒抗性盒
- 解毒过程：细胞表达潮霉素B磷酸转移酶APH(4)-Ia，催化潮霉素B环醇环4位羟基磷酸化，生成7''-O-磷酸潮霉素B；磷酸化产物无法结合核糖体，完全丧失细胞毒性。
- 应用优势：与G418、博来霉素、嘌呤霉素作用靶点完全不同，可用于双稳转/多基因共转染双重筛选体系。
五、抑菌/细胞杀伤谱（全覆盖实验体系）
- 原核生物：革兰氏阳性/阴性细菌（大肠杆菌、沙门氏菌、空肠弯曲菌等）
- 低等真核：酵母（酿酒酵母、裂殖酵母）、丝状真菌、秀丽隐杆线虫
- 高等真核：哺乳动物细胞、昆虫细胞、各类植物细胞/愈伤组织
- 特殊附加活性：选择性杀伤病毒感染细胞（病毒致细胞膜通透性上升，药物易进入胞内阻断病毒蛋白翻译）；饲料级可用作畜禽驱虫抑菌添加剂。
六、实验操作完整流程（配制+筛选）
（一）标准母液配制（通用50 mg/mL储存液）
- 器材：超净台、无菌离心管、0.22 μm水系滤器
- 配比：10 mL母液 = 500 mg潮霉素B粉末 + 10 mL无菌去离子水/无菌PBS
- 操作步骤 ① 粉末室温回温30 min，防止开盖吸水受潮； ② 少量溶剂预溶涡旋，再定容至目标体积，颠倒至完全澄清； ③ 0.22 μm滤膜负压过滤除菌（不可高压灭菌）； ④ 分装1 mL/支单次用量冻存管，避免反复冻融。
（二）储存条件与有效期
| 形态 |
储存温度 |
稳定有效期 |
| 固体粉末 |
2–8℃避光密封 |
2年以上 |
| 50 mg/mL无菌母液 |
-20℃避光分装 |
12个月 |
| 母液反复冻融 |
-20℃ |
＜1个月活性下降 |
| 工作培养基 |
4℃避光 |
7–14天 |
（三）分体系标准工作筛选浓度
提示：全新细胞/植株必须先做杀灭曲线Kill Curve确定最低致死浓度，避免浓度不足出现假阳性。
- 原核细菌（大肠杆菌LB）：50–100 μg/mL；维持培养减半至30–50 μg/mL
- 哺乳动物稳转细胞：100–300 μg/mL；肿瘤细胞耐受偏高可达400 μg/mL
- 酵母（酿酒酵母）：200–500 μg/mL；丝状真菌：300–800 μg/mL
- 转基因植物（拟南芥/水稻/烟草愈伤）：20–80 μg/mL；幼苗筛选3–15 μg/mL
- 昆虫细胞：150–250 μg/mL
（四）杀灭曲线标准实验方案
- 未转染细胞铺板，密度20–25%汇合度；
- 设置浓度梯度：0、50、100、150、200、300、400、500 μg/mL；
- 每2–3天更换含对应浓度新鲜筛选培养基；
- 持续观察7–14天，选取7天内全部空白细胞死亡的最低浓度作为筛选工作浓度。
七、细分科研应用场景
- 微生物基因工程 质粒转化大肠杆菌、酵母敲除/过表达菌株筛选；基因互补、突变株分离标记。
- 哺乳动物细胞稳定株构建 慢病毒/质粒转染稳转细胞筛选、细胞系长期维持培养；双抗性细胞（潮霉素+嘌呤霉素/G418）共表达筛选。
- 植物转基因（农杆菌转化主流筛选剂） 水稻、玉米、拟南芥、烟草、番茄愈伤分化、抗性幼苗筛选；CRISPR基因编辑植株阳性鉴定。
- 真菌/寄生虫研究 构巢曲霉、白色念珠菌基因操作；秀丽隐杆线虫转基因筛选。
- 核糖体翻译机制基础研究 体外翻译体系抑制剂，用于解析核糖体移位、tRNA转运分子机理。
- 辅助抗病毒实验 体外模型抑制病毒蛋白合成，仅科研用途，不做临床抗病毒药。
- 工业饲料领域（非科研级） 畜禽饲料添加剂，抑制肠道有害菌、驱杀线虫（仅限农业兽药合规产品）。
八、安全信息（MSDS核心要点）
1. 危险分类
剧毒化合物；吸入、皮肤接触、吞食均有毒；严重眼损伤、可诱发呼吸道过敏。 危险标识词：Danger 危险说明：H300（吞食致命）、H310（皮肤接触致命）、H330（吸入致命）、H318（严重眼损伤）、H334（吸入可致过敏哮喘）。
2. 标准个人防护PPE
- 全程穿戴：实验服、丁腈一次性手套、护目镜、超净台内操作，佩戴口罩防止粉末吸入。
3. 应急处理
- 皮肤接触：大量流水冲洗15 min，脱去污染衣物；
- 眼睛溅入：持续清水冲洗15 min并就医；
- 吸入粉末：转移至通风处，呼吸困难立即送医；
- 误食：禁止催吐，立刻就医。
4. 废液与废弃物处理
- 含潮霉素B废液：加入过量碱性溶液（NaOH）室温静置24 h灭活，再排入实验室废液系统；
- 固体废粉、污染耗材：归入有毒生物危废，不可普通垃圾桶丢弃。
5. 使用禁令
- 仅限实验室科研、农业兽药合规使用；严禁人体临床用药、食品添加剂、日化添加；
- 禁止家庭存放、非专业人员操作。
九、常见实验问题与注意事项
- 筛选效率低、大量杂细胞存活 原因：浓度偏低、培养基高温加药失活、母液反复冻融降解；解决：重做杀灭曲线、培养基降温至55℃以下再加药、母液单次分装冻存。
- 阳性转化株生长缓慢 潮霉素对阳性细胞仍有轻微生长抑制；筛选成功后可降低50%维持浓度培养。
- 不能和什么试剂共用 强碱环境（pH＞9）快速失活；高浓度还原剂会破坏药物结构，降低活性。
- 与G418对比区别
- 潮霉素B：原核+真核通用，作用核糖体移位；
- G418：仅真核细胞筛选；二者抗性基因无交叉，适合双筛选。
- 配制溶液浑浊 未完全溶解、溶剂pH偏离6–8区间，调节pH至中性并充分颠倒溶解即可澄清。
十、产品质检关键指标（试剂出厂COA）
- HPLC纯度；
- 生物效价（U/mg）；
- 干燥失重、灼烧残渣；
- 重金属、砷限量；
- 水溶液澄清度、pH；
- 无菌检测（细胞筛选专用粉末）。
