产品名称

核糖核酸酶A

CAS NO

9001-99-4

中文别名

RNA酶；核糖核酸酶；核糖核酸酶A (牛胰)；核糖核酸酶A I-A型

英文名称

Ribonuclease A

英文别名

RIBONUCLEASE I, E COLI;RIBONUCLEASE I;RIBONUCLEASE

分子式

 

分子量

相对分子质量13700EC3.1.27.5

EINECS

232-646-6

熔点

243 °C (dec.)

沸点

毒性

急性毒性：大鼠腹腔LD50：392 mg/kg大鼠皮肤接触LD50：290 mg/kg大鼠静脉LD50：310 mg/kg小鼠经腹腔LD50：250 mg/kg小鼠皮肤接触LD50：230 mg/kg小鼠静脉LD50：355 mg/kg

核糖核酸酶A Ribonuclease A    CAS：9001-99-4

1. 标准命名

• 中文通用名：核糖核酸酶A
• 中文简称：RNase A、RNA酶A
• 英文名称：Ribonuclease A
• 英文缩写：RNase A
• CAS号：9001-99-4
• EC编号：EC 3.1.27.5
• 来源：牛胰腺提取纯化（商用主流来源）

2. 分子基础参数

• 氨基酸残基数：124个氨基酸
• 单链蛋白分子量：13.7 kDa
• 等电点 pI：9.3~9.5（强碱性蛋白）
• 分子结构：含4对二硫键，结构稳定，耐受高温、去污剂

二、理化性质

1. 外观 固体：白色类白色冻干粉末；标准水溶液为无色澄清液体
2. 溶解性 极易溶于水、Tris、PBS等水溶液；不溶于丙酮、乙醇、乙醚等有机溶剂
3. 稳定性（核心特性）

• 耐高温：100℃沸水煮沸10 min仍保留大部分酶活，常规高压无法彻底灭活RNase A
• 耐酸碱：耐受pH 4.0–10.0，最适反应pH 7.0–7.5
• 耐受低浓度变性剂：0.1% SDS、低浓度尿素不快速失活
• 金属离子：不需要二价金属离子（Mg²?非必需，与DNase完全区分）

4. 灭活难点与专用灭活方式 常规高温、高压无法去除RNase污染；彻底灭活需： ① DEPC（焦碳酸二乙酯）浸泡耗材；② 200℃干烤4 h以上；③ RNase抑制剂中和酶活

三、酶催化作用机理与底物特异性

1. 切割底物：仅水解RNA磷酸二酯键，对DNA无降解活性
2. 切割位点特异性 特异性识别嘧啶核苷酸（胞嘧啶C、尿嘧啶U）3’端磷酸二酯键：

• 在C/U 3’羟基处切割RNA链
• 产物：3’-嘧啶单核苷酸 + 末端带3’磷酸基团的寡核糖核苷酸

3. 催化机制 活性中心关键氨基酸：His12、His119、Lys41，通过酸碱催化断裂RNA核糖磷酸骨架；无金属离子参与催化。
4. 区分同类酶

• RNase A：切单链RNA，不作用双链RNA、DNA；
• RNase H：仅降解DNA-RNA杂交链中RNA；
• RNase T1：专一切割G位点RNA。

四、活性单位定义（行业通用）

1. 标准活性单位：1 Kunitz Unit（库尼茨单位）
2. 定义：25℃、pH 5.0条件下，每分钟使酵母RNA溶液260nm吸光度下降0.001所需酶量；
3. 市售试剂规格：科研级 ≥ 6000 U/mg，高纯分子生物学级 ≥ 10000 U/mg。

五、核心科研应用场景

1. 质粒/基因组DNA提取（最常用）

去除样品中混杂RNA杂质：裂解菌体/细胞后加入RNase A，消化RNA，纯化高纯度DNA，避免RNA干扰紫外定量、酶切、PCR、转染实验。 标准工作浓度：10–100 μg/mL，37℃孵育15–60 min。

2. RNA结构与体外生化研究

1. 单链RNA二级结构探针：利用位点特异性切割，确定RNA单链/双链区域；
2. RNA测序早期酶切工具；
3. 体外转录后去除模板RNA杂质。

3. 分子杂交 & 核酸酶保护实验（RPA）

RNase保护实验核心工具：双链杂交RNA不被切割，未杂交单链RNA被降解，定量目标mRNA丰度。

4. 蛋白纯化工艺

去除蛋白样品内结合的核酸杂质，降低样品粘度、提升层析分离效果。

5. 细胞/微生物生化分析

细胞总核酸组分分离、酵母/细菌核酸代谢研究；区分细胞内DNA与RNA含量。

六、标准母液配制与使用体系

1. 10 mg/mL RNase A储存液（通用配方）

1. 溶剂：10 mM Tris-HCl pH7.5，15 mM NaCl
2. 配比：100 mg RNase A粉末溶于10 mL缓冲液
3. 热处理去DNase污染（关键步骤） 配制后100℃煮沸15 min，缓慢冷却至室温，彻底去除原料中混杂DNase活性，避免降解DNA；
4. 分装：100 μL/管分装，-20℃长期冻存，可稳定2年。

2. 不同实验工作浓度

1. 质粒DNA提取：20–50 μg/mL，37℃ 30 min
2. 基因组DNA纯化：50–100 μg/mL，37℃ 1 h
3. RNase保护实验（RPA）：0.5–1 μg/mL
4. 蛋白样品去核酸污染：5–20 μg/mL

3. 储存条件

• 固体粉末：2–8℃干燥避光密封，有效期3年；
• 煮沸处理后母液：-20℃避光分装，1–2年稳定；
• 稀释工作液（水溶液）：4℃仅可保存1周，不建议长期放置。

七、产品质控指标（COA出厂检测）

1. 酶活：Kunitz单位 ≥ 6000 U/mg；
2. DNase残留：无检测到DNase活性（DNA完整条带不降解）；
3. 蛋白酶残留：极低/无蛋白酶污染，不降解目标蛋白；
4. 核酸外切酶/内切酶杂质：阴性；
5. 水分、重金属、微生物限度符合分子生物学试剂标准；
6. 电泳纯度：单一条带，无杂蛋白。

八、安全操作与MSDS要点

1. 危险性 蛋白类酶制剂，无强毒性；但粉尘吸入易引发呼吸道过敏；接触黏膜、眼部产生刺激。
2. 个人防护 称量粉末佩戴口罩、手套、护目镜，全程通风橱操作，避免扬尘。
3. 废弃物处理 低毒生物试剂，废液大量稀释后排放；污染耗材常规生物垃圾处理。
4. 禁忌 严禁带入RNA无酶操作区（RNA提取、qPCR、反转录实验全程禁用RNase A，会降解实验目标RNA）。

九、关键注意事项 & 常见问题

1. RNase A耐高温，无法高压灭菌，母液只能煮沸除DNase；
2. RNA提取、反转录、荧光定量PCR实验全程禁止接触RNase A，会完全降解样本RNA；
3. 若DNA产物出现拖带、杂带，大概率RNase A添加不足或孵育时间太短；
4. 不可与强变性剂高浓度长时间共孵育，会缓慢丧失酶活；
5. 与RNase抑制剂（如RNasin）作用完全拮抗，二者不能同时使用。

十、对比区分易混淆核酸酶

酶	底物	核心用途
RNase A	单链RNA（C/U位点）	DNA提取除RNA、RPA实验
RNase H	DNA-RNA杂交链RNA	反转录后去除RNA模板
RNase T1	单链RNA（G位点）	RNA精细酶切图谱分析
DNase I	双链/单链DNA	RNA提取去除DNA杂质