产品名称

蛋白酶 K

CAS NO

39450-01-6

中文别名

蛋白激酶K溶液;ML蛋白酶K溶液;重组蛋白酶K

英文名称

Proteinase K

英文别名

ProteinaseK

分子式

n.a.

分子量

平均相对分子质量18500±500（凝胶过滤法）EC3.4.21.64

EINECS

安全数据

熔点

沸点

毒性

蛋白酶 K Proteinase K

CAS：39450-01-6 来源：Parengyodontium album（原名 Tritirachium album）；广谱丝氨酸蛋白酶 分子量：28.9 kDa ?核心特点：在 SDS、EDTA、尿素等变性剂中仍保持高活性；50–60℃活性最佳

一、主要用途（分子生物学科研主流）

1. 核酸提取（最核心用途）

基因组 DNA、质粒 DNA、总 RNA 提取（细胞、组织、血液、细菌、石蜡样本）

• 水解组蛋白，释放结合在核酸上的 DNA/RNA；
• 快速降解DNase、RNase，防止核酸被降解；
• 裂解细胞膜、核膜，充分释放核酸；

常规工作浓度：50～100 μg/mL，55–56℃孵育

适用实验：普通 PCR 模板制备、NGS 建库、血液游离核酸提取、病毒核酸提取。

2. 石蜡切片抗原修复（免疫组化 IHC）

脱蜡后的组织切片蛋白酶 K 消化，消化交联蛋白，暴露被甲醛封闭的抗原表位，提升抗体结合效率。

3. 膜蛋白拓扑结构研究（蛋白酶保护实验）

完整细胞膜外加入蛋白酶 K：仅降解膜外侧蛋白区段，膜内侧蛋白受到膜屏障保护，用来判断蛋白跨膜方向、胞内 / 胞外结构域定位。

4. 朊病毒（Prion）相关研究

消化正常细胞蛋白，抵抗蛋白酶 K 的抗性朊蛋白（PrP^Sc）可被区分，用于 TSE 传染性海绵状脑病样本检测。

5. 其他应用

• 去除蛋白结合型内毒素；
• 脉冲场电泳大片段高分子量 DNA 制备；
• 原位杂交样本前处理；
• 酶样品中杂蛋白降解；
• 单细胞样本裂解前蛋白消化。

二、常用操作参考

1. 母液配制：常用 20 mg/mL（水溶液），分装，-20℃避光保存，避免反复冻融；
2. 灭活方式：95℃ 10 min；抑制剂：PMSF、AEBSF；
3. Ca²?可稳定蛋白酶 K 结构；EDTA 不抑制酶活，但会移除钙离子，长期消化建议适量添加 CaCl?。